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免疫組化中抗體選擇要求
點擊次數(shù):4553 更新時間:2015-12-04

免疫組化中抗體選擇要求

1、一抗選擇要點

(1)選擇單克隆還是多克隆抗體。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體,單克隆抗體能目標明確地與單一特異抗原決定簇結(jié)合,另一方面,即使是同一個抗原決定簇,在機體內(nèi)也可以由好幾種克隆產(chǎn)生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中,一般單克隆抗體特異性強,但親和力相對小,檢測抗原靈敏度相對較低;而多克隆抗體特異性稍弱,抗體的親和力強,靈敏度高,但易出現(xiàn)非特異性染色(可以通過封閉等有所避免)。

(2)種屬來源。一般家兔來源的抗體多是多克?。欢∈髞碓吹目贵w多是單克隆,但也有另外。這條主要要與后面的二抗來源相匹配。

(3)實驗?zāi)康氖菣z測什么種屬的抗原,即species reactivity。這一點很重要,一般說明書上都有注明,如小鼠Ms、大鼠Rat、人Hum等等。

(4)能否做免疫組化。一般一抗說明書都會注明做WB、IHC、ICC、IF等,建議選擇注明的抗體,因為一般都是經(jīng)過文章證明。

(5)檢測標本類型。用于檢測石蠟切片還是冰凍切片,一般能做石蠟切片的抗體,可能都可以用來檢測冰凍切片,但能做冰凍切片的抗體,不一定能檢測石蠟切片中的抗原。

(6)生產(chǎn)廠家。我的經(jīng)驗是國外抗體生產(chǎn)商原裝抗體質(zhì)量一般沒問題,但有點貴;而國內(nèi)分裝廠家用的一抗工作液,價格便宜,但有時結(jié)果的穩(wěn)定性和重復(fù)性稍差,尤其不同批次重復(fù)性較差。

(7)價格與質(zhì)量的矛盾。我個人認為一抗原裝質(zhì)量可能會好點,因為許多一抗避免反復(fù)凍融,且在稀釋液中穩(wěn)定性較差(若時間長),但價格較貴。

2、二抗選擇要點

(1)種屬來源。主要根據(jù)一抗種屬來源來決定購買二抗來源,如一抗是小鼠來源,那二抗就買抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。

(2)標記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標記的二抗,以與后面的SP結(jié)合反應(yīng);而免疫熒光染色就需要購買不同熒光素標記的二抗,如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。這主要與后面有無三抗和三抗種類有關(guān)。

(3)選擇IgM還是IgG。一般一抗是IgM,那么二抗就選擇IgM;反之,一抗是IgG,則二抗選擇IgG。

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